咨询热线

19952888026

当前位置:首页  >  技术文章  >  二氧化碳培养箱灭菌方法

二氧化碳培养箱灭菌方法

发布时间:2022-06-16      点击次数:60

1655350043101.jpg

二氧化碳培养箱水托盘加硫酸铜方法

  配制方法:20g无水硫酸铜+5ml浓硫酸+1L高压过的双蒸水

  配制饱和硫酸铜溶液 

 细胞间彻底消毒

       1.熏蒸无菌间,甲醛加高锰酸钾即可,一般72小时后开门通气。

       2.用0.5%新洁尔灭擦拭超净台和墙壁,确保不留死角,地面用新洁尔灭消毒液拖地。

       3.75%酒精对无菌间的所有物品进行消毒,包括孵箱内。

       4.紫外灯,空气净化器打开至少4h以上,紫外灯可以过夜。

 

       目前,控制水盘内污染的方法有如下几种:

       1、 定期(至少每两周一次),更换水盘内的无菌蒸馏水或无菌去离子水。

       2、 在水盘内添加适量硫酸铜,配制方法:20g无水硫酸铜+5ml浓硫酸+1L灭菌纯水。

       3、 夏季气温高时,水盘里加0.02%的叠氮钠可以有效的预防真菌污染。

       4、 水盘内添加适量抗生素。

       5、 定期为二氧化碳培养箱(含水盘)进行一次高温灭菌。

 

       对付霉菌通常用饱和的硫酸铜溶液,放在培养箱的装水盘中,细胞房的空调要用除湿的功能。如果不幸染上,要用84液擦培养箱,再用75%酒精擦。

 灭菌操作:

 在无菌箱内每立方米用甲醛8—10毫升,高锰酸钾5克,熏蒸45分钟后接种

 在无菌箱中每立方米用甲醛8-10毫升、高锰酸钾0.25千克,熏蒸45分钟后接种,栽培种接种量按每瓶二级种接30-40袋为宜。

 (一)常用消毒剂

       现将常用的药品及其配制、使用方法,介绍如下:

    1. 35%甲醛水溶液(HCHO):又名福尔马林,使蛋白质变性。用于培养室、无菌室的灭菌。

  2.0.1%的升泵水(HgCL3):能使蛋白质变性,抑制酶类。0.1%升泵配制方法是称取升泵0.1克,    用少许酒精溶解,再加水至100毫升即成。用于无菌箱、二氧化碳培养箱、培养皿四周表面以及手指的灭菌。

 3.石炭酸(C6H5OH),5%浓度喷雾后,能使蛋白变性沉淀。石炭酸(苯酚)50毫升,加水950毫升配成。用于 工作服、实验桌的灭菌。杀菌效果同升泵。

4.高锰酸钾(KMnO4):氧化剂。0.1%浓度能使蛋白质与氨基酸氧化,失去酶的活性,用于消毒,能抑制或杀死 杂菌。

 5.乙醇(CH3CH3OH):又称酒精。消毒以75%浓度的效果好。它能使蛋白质脱水变性。高浓度酒精会使蛋白质很快脱水凝固,消毒作用反而减弱。

  6.新洁尔灭:0.25%新洁尔灭用于无菌箱、无菌室的灭菌。一般新洁尔灭5%原液50毫升;加水950毫升配成。

 7.漂白粉水:取漂白粉10克,加水140毫升配成。通常在使用前临时配制,静置1~2小时,取上清液喷射,进 行室内消毒,每平方米用1升。

 8.药皂:煤酚皂、硼酸皂等各种药皂的水溶液,均可用于器具、橡皮塞及手指的消毒。

 9.2%硫酸铜溶液:用硫酸铜(胆矾)2克,加水至 100毫升加热溶解配成。用于床架、木架等各种菌种架的消 毒。还可用5%硫酸铜溶液。

10.0.5%波尔多液:先用硫酸铜1斤,溶于100斤水, 再用石灰1斤,加水100斤。然后等量混合起来即成。用于菌种架、段木的消毒。

 11.多菌灵:用于杀灭真菌、半知茵。1:800倍拌料或 1:500倍喷洒均可。

   

       (二)无菌箱及无菌室的消毒灭菌

 

       无菌箱的消毒灭菌,可采取以下几种方法:

  

       1.用甲醛和高锰酸钾混合熏蒸:一般每平方米需40%甲醛10毫升、高锰酸钾8毫升,进行熏蒸。使用时,先密闭门窗,量甲醛溶液盛入容器中、然后倒入量好的高锰酸钾,人员随之离开接种室,关紧房门,熏蒸20—30分钟即可。

  

       2.0.1%升泵水消毒:用0.1%升泵水浸过的纱布或海绵进行指擦,或用喷雾器喷雾灭菌,使箱内的上下左右都沾上升泵水,手也可用升泵水消毒,并把袖子卷起来。喷雾后 20~30分钟,箱内的杂菌和雾滴一起落到箱底被杀死,内部的空气就变得很清洁。

   3.紫外线照射灭菌:在无菌箱中装一支200伏、3O瓦的紫外线灯管;每次开20~30分钟,就能达到空间杀菌的 目的。照射结束后,罩黑布半小时,以增强杀菌效果。

   4.石炭酸喷雾:在每次接种之前,用5%石炭酸溶液喷雾,可促使空气中的微粒和杂菌沉降,防止桌面微尘飞扬,并有杀菌作用。

   5.石灰揩擦:经常用药物熏蒸,易造成酸性环境,特别用甲醛和高锰酸钾熏蒸长久,污染往往越来越严重,预防办法可把各种药品交替使用,过一段时间(约五周)用石灰擦洗一遍。实践证明,这样做效果很好。

 无菌室消毒同无菌箱。

      三)无菌室的使用规程

   无菌室无固定程序,但按一般操作应遵循如下规程:

    1.接种室内和缓冲室内使用前,用5%石炭酸溶液喷雾。把所需要的器材搬入缓冲室清洗,等晒干后搬入接种 室,打开紫外线灯,照射杀菌。

  2.穿上工作服及无菌工作帽、鞋,然后用煤皂液洗手2 分钟。进人接种室后,查验器械是否放在一定位置。然后用 5%石炭酸溶液重点在工作台的上方和附近的地面上喷雾。然后退回缓冲室。还可给接种室门口地面洒一层石灰,进门时踩石灰可使鞋底保持无杂菌状态。

     3.接种操作前,用70%的酒精棉球擦手。进行无菌操作时,要严格认真,动作轻捷,尽量减少空气流动。

   4.工作结束后,立即将台面收拾干净,不留残物。然后用5%石炭酸全面喷洒。

  5.操作时,注意安全。如棉塞着火,用手紧握即可熄灭。如打破菌瓶,可用抹布沾5%石炭酸,收拾到废物桶 内。每次的污染物应小心放在盘内,盖严拿出室外深埋或烧掉。

  (四)无菌室空气污染情况的检验

   定期检验无菌室空气污染情况,对改进灭菌措施,提高成品率是非常必要的。常用方法步骤如下:

   1.平板检验法:用常规培养基,倒成平板,收入接种室。在事先熏蒸好的接种室,使用前半小时或1小时把供试的培养皿或试管打开,按预定时间盖好培养皿或试管。留对照皿不打开。然后一起放入30℃的温箱中培养48小时,检查有无菌殖生长,并由菌落形态,判断杂菌种类。一般要求平板培养基开盖5分钟,菌落不超过3个;叙面培养基开塞 30分钟者,以不出现菌落为合格。

   2.斜面检验法:将常用的琼脂斜面培养基各取二管, 放入接种室,按无菌操作各将其中的一管的棉塞取出,放在灭菌的培养皿内。经过一定时间后,再将棉塞通过火焰,塞回试管,连同对照一起培养。经48小时后,检验无杂菌生长。和上边方法同。

   3.空气污染情况检验:在接种过程中,人员的出过、器材的搬放、接种操作的动作等原因造成空气污染,检验方法是在准备工作结束后,接种操作开始时,按上述方法打开培养皿盖子或试管塞,经5分钟、30分钟或直到工作结束时再盖好,以检验在不同的使用时间内,空气污染的程度。

   如霉菌较多时;可先用5%石炭酸全面喷射后,再用甲醛熏蒸。如细菌较多时,可采取用乳酸和甲醛交替熏蒸的办法加以杀灭。


江苏恒敏仪器制造有限公司
  • 联系人:王先生
  • 地址:江苏省盐城市盐都区
  • 邮箱:1595675207@qq.com
  • 传真:
关注我们

欢迎您关注我们的微信公众号了解更多信息

扫一扫
关注我们
版权所有©2022江苏恒敏仪器制造有限公司All Rights Reserved    备案号:    sitemap.xml    总流量:24036
管理登陆    技术支持:化工仪器网